Calculadora de Eficiencia de qPCR
Usa nuestra calculadora de eficiencia de qPCR para calcular la eficiencia de qPCR a partir de la pendiente de una curva estándar. Incluye qPCR explicado, qué es la eficiencia de qPCR, la fórmula de eficiencia de qPCR, pasos de cálculo de eficiencia de qPCR y consejos prácticos sobre cómo mejorar la eficiencia de qPCR.
qPCR explicado: ¿Qué es la eficiencia de qPCR?
qPCR (PCR cuantitativa), también llamada PCR en tiempo real, mide la amplificación de ADN a medida que ocurre mediante el seguimiento de la fluorescencia a lo largo de los ciclos. Se usa comúnmente para estudios de expresión génica, detección de patógenos y cuantificación de ADN.
La eficiencia de qPCR describe qué tan bien se amplifica una secuencia objetivo en cada ciclo. En una reacción ideal, la cantidad de producto se duplica en cada ciclo (100% de eficiencia).
Esta calculadora de eficiencia de qPCR te ayuda a calcular la eficiencia de qPCR a partir de la pendiente de una curva estándar (Ct vs log concentración), que es el enfoque más común para calcular la eficiencia de qPCR.
Fórmula de eficiencia de qPCR
La eficiencia normalmente se calcula a partir de la pendiente de la curva estándar construida con diluciones seriadas.
Una pendiente de aproximadamente −3.32 corresponde a ~100% de eficiencia.
Con 100% de eficiencia, la amplificación por ciclo es 2×.
Una pendiente cercana a −3.32 es el objetivo clásico para ~100% de eficiencia.
Una pendiente menos negativa generalmente indica un mayor factor de amplificación (hasta cierto punto).
Cómo usar la Calculadora de Eficiencia de qPCR
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Ingresa la pendiente de tu curva estándar de qPCR (Ct vs log10 de la concentración).
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La calculadora aplica la fórmula de eficiencia de qPCR: E(%) = (10^(-1/slope) − 1) × 100.
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Revisa el porcentaje de eficiencia y el factor de amplificación por ciclo.
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Si la eficiencia está fuera del rango objetivo típico, usa los consejos de solución de problemas a continuación para mejorar la eficiencia de qPCR.
Preguntas frecuentes
La eficiencia de qPCR es qué tan eficazmente tu PCR amplifica el objetivo en cada ciclo. 100% de eficiencia significa que el objetivo se duplica en cada ciclo (amplificación 2× por ciclo).
Lo más común es calcularla a partir de la pendiente de la curva estándar usando E(%) = (10^(-1/slope) − 1) × 100.
Una pendiente alrededor de −3.32 corresponde a ~100% de eficiencia (aproximadamente 2× de amplificación por ciclo).
E(%) = (10^(-1/slope) − 1) × 100, donde slope proviene de Ct vs log10 de la cantidad de entrada.
Muchos flujos de trabajo buscan aproximadamente 90%–110% de eficiencia, pero lo aceptable depende de tu ensayo y de los requisitos de validación.
Mejoras comunes incluyen optimizar el diseño de cebadores (evitar dímeros, igualar Tm), ajustar la temperatura de alineamiento, mejorar la calidad de la plantilla (eliminar inhibidores), optimizar condiciones de Mg2+ / tampón y verificar la precisión de la serie de diluciones para la curva estándar.
qPCR mide la amplificación en tiempo real usando fluorescencia y proporciona información cuantitativa (como valores Ct), mientras que la PCR tradicional suele ser detección al final (endpoint).
A menudo indica problemas como dímeros de cebadores, amplificación no específica, errores de pipeteo/dilución en la curva estándar o artefactos de fluorescencia.